ELISA halva tulemusega?Järgige meid, et valida õige Elisa taldrik.
Sobiva ELISA plaadi valimine on esimene samm eduka ELISA katse poole, kuid paljud inimesed ignoreerivad seda. Kui inimesed katseid teevad, võtavad nad sageli arvesse ainult katset ennast, kuid ei tea, et tootel on sageli katsele suur mõju. Õige toodete valik aitab kaasa katse õnnestumisele. Tavaliselt võtame ELISA katsete läbiviimisel arvesse järgmisi tegureid:
1. Põhja kuju
Praegu kujundavad tootjad ensüümiga märgistatud süvendid iseseisvate kolonnidena ja suurendavad sobivalt kaevude vahelist kaugust, et neid saaks üksteisest sõltumatult eraldada, minimeerides seeläbi ristsaastumist. Erinevat tüüpi Elisa plaatidel on erineva kujuga kaevu põhi. Siin on mõned levinud augupõhja kujundid:
Lame põhi: põhi on horisontaalne, seda nimetatakse ka F-põhjaks. Valgust ei suunata läbi põhja, mis võib valgust kõige suuremal määral edastada. Kasutage katseteks, mis nõuavad nähtavuse või muudel põhjustel ümarat põhja.
Ümmargune põhi: tuntud ka kui U-põhi, tagab parimad puhastustulemused ja hübriidjõudluse, mis sobib rakendustele, mis vajavad setete testimist.
C-põhi: see võib pakkuda hea puhastusefekti lameda põhja ja ümara põhja vahel, ühendades samal ajal lameda põhja eelised.
Koonuspõhi: tuntud ka kui V-põhi, sobib täpseks proovide võtmiseks ja mikroproovide säilitamiseks väikeste koguste optimaalseks taastamiseks.
2. Elisa taldriku värv
Elisa taldrikul on kolm värvi: läbipaistev, must ja valge.
Enamik ELISA-test valib katsematerjalideks läbipaistvad plaadid. Luminestsentsi tuvastamiseks kasutatakse üldiselt valgeid ja musti Elisa plaate. Must ELISA plaat ise neelab valgust, seega on selle signaal nõrgem kui valge ELISA plaadi oma. Musti Elisa plaate kasutatakse üldiselt tugevama valguse tuvastamiseks, näiteks fluorestsentsi tuvastamiseks; vastupidi, valgeid Elisa plaate saab kasutada nõrgema valguse tuvastamiseks ning neid kasutatakse sageli üldise kemoluminestsentsi ja substraadi värvide arendamiseks (näiteks kahekordne lutsiferaas). reportergeenianalüüs).
3. Elisa plaadi materjal
Levinud materjalid on polüetüleen (PE), polüpropüleen (PP), polüstüreen (PS), polüvinüülkloriid (PVC) ja polükarbonaat (PC).
ELSIAs kõige laialdasemalt kasutatavad materjalid on polüstüreen ja polüvinüülkloriid. Polüvinüülkloriidist pehme plaat on õhuke, seda saab lõigata ja hind on madal. Puuduseks on see, et viimistlus ei ole nii hea kui polüstüreenplaat ja augu põhi pole nii tasane kui polüstüreen. Kuid ka vastav taustaväärtus suureneb. Tavaliselt viiakse ioonsiirdamine läbi ELISA plaadi pinnale ja aktiivsed funktsionaalrühmad, nagu aldehüüdrühmad, aminorühmad ja epoksürühmad, viiakse polümeeri pinnale, et parandada substraadi pinna jõudlust.
4. erinevad sidumismehhanismid
Kattematerjali tõhus sidumine plaadi põhjapinnaga on ELISA määrav etapp. Seetõttu tuleks enne katset hoolikalt analüüsida kaetava aine struktuurseid ja keemilisi omadusi, et valida sobiv Elisa plaat. Üldiselt on kattematerjali sidumiseks plaadi põhjaga mitu võimalust: passiivne adsorptsioon, kovalentne sidumine ja afiinsuse püüdmine.
Passiivne adsorptsioon: Passiivse adsorptsiooni mehhanism on keeruline ning kattematerjali ja plaadi põhja vaheline sidumine sõltub peamiselt molekulidevahelistest jõududest (van der Waalsi jõud) ja vesiniksidemetest. Enamikus ELISA-testis toimub katteaine seondumine plaadi põhjaga passiivse adsorptsiooni teel. Üldiselt saavutatakse keskmise ja suure molekulmassiga antigeenide (või antikehade) ja plaadi põhja vaheline seondumine passiivse adsorptsiooniga. Elisa plaadi valimisel võetakse sageli arvesse plaadi põhjapinna hüdrofoobseid/hüdrofiilseid omadusi. Järgmises tabelis on loetletud erinevate hüdrofiilsete aluspindade kasutusala ja kasutusala:
hüdrofiilsed | Prioriteetne sidumine | Peamine kasutusala |
- | Molekulid, mis sisaldavad olulisi hüdrofoobseid piirkondi, nagu lipiidid, lipoproteiinid, suured valgud | Antigeen ELISA, FlA, LIA |
pluss | Hüdrofiilsete/hüdrofoobsete omadustega biomolekulid, nagu keskmised kuni suured valgud, immunoglobuliinid, albumiin | Double Antibody Sandwich ELISA, antigeeni ELISA |
pluss pluss | Hüdrofiilsete/hüdrofoobsete omadustega biomolekulid, nagu väikesed kuni suured valgud, immunoglobuliinid, albumiin, LPS, fosforüülitud valgud, glükoproteiinid | Topeltantikeha ELISA, FIA, LIA |
pluss pluss pluss | Glükoproteiinid, polaarsed lipiidimolekulid, fosfolipiidid, kardiolipiidid | Antigeeni ELISA |
Afiinsuse püüdmine: Afiinsuse püüdmine põhineb märgistatud makromolekulide spetsiifilisel seondumisel nende vastavate retseptoritega. Märgistatud makromolekule saab saada kas keemilise sidestamise või geenitehnoloogia abil.
Affinity Capture'i funktsioonid on järgmised:
1. kõrge spetsiifilisus
2. Saab parandada mõõtmistulemuste signaali-müra suhet
Levinumad kaevupõhja pinnad on: streptavidiiniga (streptavidiiniga) kaetud pind; nikkelkelaadiga (Nickel Chelate) kaetud pind ja glutatiooniga (Glutathione, GSH) kaetud pind.
3. Streptavidiini pind: Streptavidiini ja biotiini kõrget afiinsust ja spetsiifilisust kasutatakse põhjaplaadi seondumise saavutamiseks kaetud valguga.
4. Nikkelkelaadi pind: nikkelkelaat kinnitatakse polümeeri pinnale, et siduda liitvalke His (histidiini) märgistega.
5. Glutatiooni pind: ensüümi ja substraadi spetsiifilisuse kasutamine glutatiooni ja glutatioonsulfhüdrüültransferaasi (GST) vahel, et saavutada põhjaplaadi seondumine kattevalguga.
Miks valida BKMAM Elisa plaat?
Valmistatud 100 protsenti polüstüreenist,
Sobib adherentseks rakukultuuriks,
Lame alus, ühtlane paksus ja ühtlane suurus reaktsioonipooluste jaoks,
Steriilne individuaalse pakendiga,
Kõrge kvaliteet tehasehinnaga.
