Rakukultuuri põhitingimused
1. Sobiv rakukultuuri keskkond
Sobiv rakukultuuri keskkond on üks tähtsamaid tingimusi rakkude kasvuks ja proliferatsiooniks in vitro. Kultuurikeskkond ei paku mitte ainult rakkude toitumist ja põhiaineid, et edendada rakkude kasvu ja vohamist, vaid pakub ka elukeskkonda kultiveeritud rakkude kasvuks ja paljunemiseks.
2. Kvaliteetne seerum
Praegu nõuab enamik sünteetilisi meediume seerumi lisamist. Seerum on rakukultuuri üks olulisemaid komponente, mis sisaldab erinevaid kasvufaktoreid ja muid rakkude kasvuks vajalikke toitaineid.
3. Püsiv rakkude kasvutemperatuur
Kultiveeritud rakkude jõulise kasvu säilitamiseks peab olema püsiv ja sobiv temperatuur.
4. Sobiv gaasikeskkond
Gaas on üks imetajate rakkude ellujäämiseks vajalikke tingimusi ning nõutavad gaasid on peamiselt hapnik ja süsinikdioksiid.
5. Rakukultuuri temperatuur
Kultiveeritud rakkude jõulise kasvu säilitamiseks peab olema püsiv ja sobiv temperatuur. Erinevat tüüpi rakkudel on kultuuritemperatuurile erinevad nõuded. Inimese rakukultuuri standardtemperatuur on 36,5 °C ± 0,5 °C. Kõrvalekalle sellest temperatuurivahemikust mõjutab rakkude normaalset ainevahetust ja isegi sureb.
6. Sobiv gaasikeskkond
Gaas on imetajate rakukultuuri ellujäämiseks üks vajalikke tingimusi ning nõutavad gaasid on peamiselt hapnik ja süsinikdioksiid. Hapnik osaleb trikarboksüülhappe tsüklis, tekitades energiat rakkude kasvuks ja vohamiseks ning sünteesides erinevaid rakkude kasvuks vajalikke komponente.
Rakukultuuri ühine saastumine
1. Bakteriaalne saastumine
Bakterite saastumine on kõige levinum. Kui operatsioon on veidi ebakorrektne, põhjustab see rakkude saastumist. Pärast bakterite saastumist ilmub see mikroskoobi all vaadelduna mustade õhukeste liivaribadena. Vardakujuline jne. Teiseks muutub kultuurimeedium kollaseks ja häguseks ning petri tassis on selgelt näha peeneid liivakujulisi setteid ning aeg-ajalt on kummaline lõhn.
2. Seente saastumine
Seentega saastunud kultuurilahus on selge ja läbipaistev, mitte nagu suur bakteriaalse infektsiooni puhang, mistõttu on seda raske varakult tuvastada. Mõnikord näeb see mikroskoobi all välja nagu hõõgniit, mõnikord näeb see välja nagu korall ja aeglaselt kasvab väga õhuke must hõõgniit. Kui on liiga hilja, on raske rakke päästa.
3. Hallituse saastumine
Kooskõlas seeninfektsioonidega, sest kultuurikeskkond on selge, on seente saastumist raske varakult tuvastada, kui on sageli liiga hilja. Kultuurikeskkonnas ilmusid aeglaselt flokuulentsed lisandid ja mikroskoobi all võis näha filamentseid massilisi ujuvaid objekte, nagu tuules olevad katakiinid. Rakud võivad veel kasvada, kuid aja jooksul rakud halvenevad ja lõpetavad kasvamise.
4. Mükoplasma infektsioon
Kultuurimeedium muutub häguseks. Pärast seda, kui mükoplasma nakatab rakke, ei ole tsütopaatilised muutused ilmsed, kuid rakuseisund halveneb ja kasv aeglustub. Mikroskoobi all võib olla väikesed mustad laigud, kuid kultuurimeedium ei ole üldiselt hägune. Pärast rakkude läbimist ilmusid rakkudevahelised mustad laigud, rakud vakuoleeriti ja paljud rakud sarnanesid apoptoosi ja nekroosiga. Lõpuks rakud ujuvad ja surid täielikult.
Rakkude saastumise vältimine
Heade eeskirjade ja eeskirjade kehtestamine võib rakkude saastumise vähendamisel palju ära teha. Sealhulgas läbipääsusüsteem, töönormid ja igapäevane juhtimissüsteem.
Juurdepääsusüsteem: sealhulgas personal ja materjalid. Töötajaid tuleb koolitada enne, kui nad saavad ise tegutseda, ja nad peavad enne laborisse sisenemist vastama kulumisnõuetele, nagu valged mantlid, isolatsioonikleidid, maskid, kindad jne. Vajalike esemete puhul tuleks ühekordselt kasutatavad esemed rangelt steriliseerida ja steriliseerida ning ostetud esemed tuleb osta tavalistest ja usaldusväärsetest kanalitest. Äsja ostetud rakke tuleb enne kasutamist testida ja kontrollida.
Töökirjeldused: Kõige parem on sõnastada rutiinsete toimingute spetsifikatsioonid ja laboritöötajad peavad järgima tööspetsifikatsioone, mida ei saa soovi korral muuta, ning kasvatama ka laboritöötajate häid tööharjumusi. Näiteks pärast pipeti otsa imemist ei pikendata seda teist korda söötmesse ja üks kord imetakse piisav kogus söötmeid. Vedeliku lisamisel tuleb vedelik lisada suspensiooni nii palju kui võimalik, mis võib tõhusalt vältida mükoplasma saastumist ja rakkude ristsaastumist. Lisaks sellele, kui võimalik, kasutage korraga ainult ühte rakuliini ja ristsaastumise vältimiseks on parem rakkude vahel veidi ajavahemikku.
Igapäevane juhtimissüsteem: See sisaldab keskkonna ja tarbekaupade, reaktiivide jms kasutamise, puhastamise ja hooldamise reegleid ja meetodeid. Samuti on olemas reaktiivide ja tarbekaupade tarbimise, varude ja hankimise juhtimine, sealhulgas rakuproovide kahetasandiline varude haldamine. Saasteallikate puhul, mida ei ole lihtne leida, on kõige parem läbi viia regulaarne testimine, peamiselt mükoplasma saastumine ja rakkude ristsaastumine.
BKMAM Bio pakub rakukultuurile vastavaid tarbekaupu:
Ühekordsed plastikust ümmargused/ruudukujulised petriroad:
Suure läbipaistvusega polüstüreenist materjal (PS);
Pind on sile ja tasane ning mikroskoobi vaatluse all ei ole rakkude optilist moonutust;
Virnastamine muudab virnastamise ja ladustamise lihtsamaks;
Etüleenoksiidi steriliseerimine (EO);
Kulumis- ja korrosioonikindlus.
Rakukultuuri roogade järgiv kohtlemine:
Polüstüreeni materjal (PS);
Elektronkiire steriliseerimine, pürogeen puudub, toksiin puudub;
Vaakumplasma pinnatöötlus, suurepärane rakkude haardumine;
Pind on sile ja tasane ning mikroskoobi vaatluse all ei ole rakkude optilist moonutust;
Virnastatav disain muudab virnastamise ja hoiustamise lihtsamaks.
Plastikust rakukultuuri plaadid:
Polüstüreeni materjal (PS);
Sobib normaalsele rakukultuurile, mittekinnitavale raviplaadi tüübile;
Ei pürogeeni, toksiini, steriliseeritud;
Lihtne pisaratüüpi sõltumatu pakend, lihtne kasutada;
Rakukultuuri plaatide kleepuv töötlemine:
Polüstüreeni materjal (PS);
Kleepuv ravi (TC ravi) plaaditüüp, mis sobib kleepuvate rakkude kultuurile;
Ei pürogeeni, toksiini, steriliseeritud;
Lihtne pisaratüüpi sõltumatu pakend, lihtne kasutada;
Kõik on lamedad põhjad.
Rakukultuuri kolbide järgiv ravi:
Polüstüreeni materjal (PS);
Elektronkiire steriliseerimine, pürogeen puudub, toksiin puudub;
Vaakumplasma pinnatöötlus, suurepärane rakkude haardumine;
Hingav kate, mis soodustab gaasivahetust ja takistab mikroorganismide läbimist.
Sisemised/välised spin krüvoviaalid:
100% puhas polüpropüleenmaterjal (PP);
Talub 15psi, 121 °C steriliseerimist;
Toru sein on paksenenud ja toru korpusel on skaala ja kirjutamisala;
Torukatte niidi ja toru korpuse vahel on silikoonrõnga tihend, et tagada tihedus;
Ei DNase,ei RNase, ei pürogeen, ei endotoksiini.
