Mikroobialased teadmised, mida soovite
Mikroorganismid on looduses laialdaselt eksisteerivate ja palja silmaga nähtamatute pisikeste organismide rühm, mida tuleb optilise mikroskoobi või elektronmikroskoobi abil sadu, tuhandeid või isegi kümneid tuhandeid kordi suurendada. Nende eelisteks on väiksus, lihtne struktuur, kiire paljunemine, lihtne varieerumine ja tugev kohanemisvõime keskkonnaga.
Mikroorganismide klassifikatsioon:
Mikroorganisme on mitut tüüpi, vähemalt rohkem kui 100,000 liiki. Nende struktuuri, keemilise koostise ja eluviiside ning muude erinevuste järgi võib jagada kolme kategooriasse.
Eukarüootse mikroobiraku tuumal on suurem diferentseerumisaste, sealhulgas tuumamembraan, tuum ja kromosoomid; tsütoplasmas on terviklikud organellid (nagu endoplasmaatiline retikulum, ribosoom ja mitokondrid jne). Seda tüüpi mikroorganismide hulka kuuluvad seened.
Prokarüootsetel mikroobirakkudel on madal tuumade diferentseerumisaste, ainult primitiivne nukleoplasm, puudub tuumamembraan ja nukleool; organellid ei ole väga terviklikud. Selliseid mikroorganisme on palju liike, sealhulgas bakterid, spiroheedid, mükoplasmad, riketsia, klamüüdia ja aktinomütseedid.
Rakulistel mikroorganismidel puudub tüüpiline rakustruktuur ega ensüümsüsteem energia tootmiseks ning nad saavad kasvada ja paljuneda ainult elusrakkudes. Viirused kuuluvad seda tüüpi mikroorganismide hulka.
Mikroorganismide eraldamine ja puhastamine
Mikroobikultuuri, mis sisaldab rohkem kui ühte liiki, nimetatakse segakultuuriks. Kui kõik koloonia rakud pärinevad ühest vanemrakust, nimetatakse kolooniat puhaskultuuriks. Bakteriliikide tuvastamisel peavad kasutatavad mikroorganismid üldjuhul olema puhaskultuurid. Puhta kultuuri saamise protsessi nimetatakse eraldamiseks ja puhastamiseks ning meetodeid on palju.
1. Vala plaadi meetod
Esiteks lahjendatakse mikroobide suspensioon järjestikku ja teatud kogus lahjendust segatakse täielikult lahustunud toiteagarisöötmega, mida hoitakse umbes 40-50 kraadi juures, ning seejärel valatakse segu steriilsesse Petri tassi. Pärast tahkumist inkubeeriti plaati tagurpidi konstantses kambris. Üks rakk korrutatakse, et moodustada koloonia, üks koloonia võetakse suspensiooni valmistamiseks ja ülaltoodud samme korratakse mitu korda, et saada puhas kultuur.
2. Katmise tasapinnaline meetod
Esmalt lahjendatakse mikroobide suspensioon korralikult ja teatud kogus lahjendust kantakse steriilsele tardunud toiteagariplaadile ning seejärel jaotatakse lahjendus steriilse klaaslabidaga ühtlaselt söötme pinnale. Konstantsel temperatuuril inkubeerimisel võib saada ühe koloonia.
3. Plaadile kirjutamise meetod
Lihtsaim viis mikroorganismide eraldamiseks on triibud. Viige väike kogus kultuuri steriilse silmuse abil plaadile. Kirjutamise meetodeid on palju. Levinud kirjutamismeetodid, mis tõenäolisemalt ilmuvad ühe kolooniana, on kaldkriipsu meetod, kõvera meetod, ruudu meetod, kiirgusmeetod ja nelja ruudustiku meetod. Kui inokulatsioonisilmus liigub söötme pinnal tahapoole, lahjendatakse järk-järgult inokulatsioonisilmuse bakterivedelik ja lõpuks hajub tõmmatud joonele üks rakk. Pärast kultiveerimist kasvab iga rakk kolooniaks.
4. Rikastuskultuuri meetod
Rikastuskultuuri meetodi meetod ja põhimõte on väga lihtsad. Saame luua tingimused, mis võimaldavad kasvada ainult soovitud mikroobidel ja nendes tingimustes suudavad soovitud mikroobid tõhusalt konkureerida teiste mikroobidega ja ületada kasvuvõime poolest palju teisi mikroobe. Kui soovitakse eraldada mõned kohustuslikud parasiidid, tuleb proovid nakatada vastavatesse vastuvõtlikesse peremeesrakkude populatsioonidesse, et need kasvaksid suurel hulgal. Puhtad parasiitbakterid on võimalik saada korduva külvamisega.
5. Anaeroobne meetod
Laboris võib mõne anaeroobse bakteri isoleerimiseks kasutada kultiveerimisnõuna algset söödet sisaldavat katseklaasi ning katseklaasi kuumutada keevas veevannis mitu minutit, et väljutada söötmes lahustunud hapnik. . Seejärel jahutatakse see kiiresti ja nakatatakse. Pärast inokuleerimist lisati söötme pinnale steriilne parafiin, et isoleerida sööde õhust. Teine meetod on asendada pärast inokuleerimist keskkonnas olev gaas N2 või CO2-ga ja seejärel sulgeda katseklaasi suu leegi kohale. Mõnikord võib mõne anaeroobse bakteri tõhusamaks isoleerimiseks eraldatud proovi nakatada söötmele ja seejärel asetada Petri tassi täielikult suletud anaeroobsesse kultiveerimisseadmesse.
6. Üksikrakuline (või üksiku spoori) eraldamise meetod
Üksikute rakkude või üksikute indiviidide eraldamiseks segapopulatsioonidest puhta kultuuri saamiseks kasutatakse mikroeraldusmeetodit. Suuremate mikroorganismide puhul saab kapillaari abil ekstraheerida üksiku isendi. Suhteliselt väikeste isenditega mikroorganismide puhul on puhaskultuuri saamiseks vaja mikromanipulaatorit üksikute mikroobirakkude või eoste korjamiseks mikroskoobi all oleva kapillaari või mikronõela, konksu, silmuse jms abil. Üherakulisel eraldamismeetodil on töötehnoloogiale suhteliselt kõrged nõuded.
Mikroobikultuur
1. Vastavalt sellele, kas kultiveerimisel on vaja hapnikku, võib selle jagada kahte kategooriasse: aeroobne kultuur ja anaeroobne kultuur.
Aeroobne kultuur: tuntud ka kui "aeroobne kultuur". See tähendab, et kui seda mikroorganismi kasvatatakse, vajab see hapniku lisamist, muidu ei kasva see hästi. Laboris saadakse kaldkultuurid vatikorkide kaudu väljastpoolt steriilse õhu hankimisega. Suurem osa Erlenmeyeri kolvis olevast vedelkultuurist loksutatakse loksuti abil, nii et välisõhk pääseb pidevalt pudelisse.
Anaeroobne kultuur: tuntud ka kui "anaeroobne kultuur". Sellised mikroorganismid ei vaja kasvatamisel osalemiseks hapnikku. Anaeroobsete mikroorganismide kasvatamise protsessis on kõige olulisem punkt hapniku eemaldamine söötmest.
2. Söötme füüsikalise oleku järgi võib selle jagada kahte kategooriasse: tahkekultuur ja vedelkultuur.
Tahkekultuur: see on meetod tüvede inokuleerimiseks lahtisesse ja toitainerikkasse tahkesse söötmesse ning mikroorganismide kultiveerimiseks sobivates tingimustes.
Vedelkultuur: katsetes võib vedelkultuur panna mikroorganismid kiiresti paljunema ja saada suure hulga kultuure. Teatud tingimustel on see ka tõhus meetod mikroorganismidele bakterite selekteerimiseks ja rikastamiseks.
BKMAM biotech pakub mikroobikultuuri jaoks vastavaid laboritarvikuid:
Ühekordselt kasutatavad plastikust ümmargused/kandilised Petri tassid:
lKõrge läbipaistvusega polüstüreenmaterjal (PS);
lPind on sile ja tasane ning mikroskoobiga vaadeldavate rakkude optiline moonutus puudub;
l Virnastamise disain muudab virnastamise ja ladustamise lihtsamaks;
l Steriliseerimine etüleenoksiidiga (EO);
l Kulumis- ja korrosioonikindlus.
Ühekordselt kasutatav plastikust inokulatsioonipulk/silmus:
polüstüreenmaterjal (PS);
Saastevastane, endotoksiini-, DNA-, RNaasi- ja pürogeenivaba;
Sõltumatu pakend on steriliseeritud;
Peen töötlus ja täielikud spetsifikatsioonid;
Ühekordselt kasutatav plastikust rakulaotur, bakterite levitaja:
polüstüreenmaterjal (PS);
Saastevastane, endotoksiini-, DNA-, RNaasi- ja pürogeenivaba;
L-kujuline disain, lihtne kasutada;
Ühekordne kasutus, kerge ja mugav.
Roostevabast terasest / ühekordselt kasutatavad steriilsed spetsifikatsiooniplaadid:
Roostevabast terasest spetsifikatsiooniplaat on valmistatud roostevabast terasest ja ühekordselt kasutatav spetsifikatsiooniplaat on valmistatud toidukvaliteediga polüpropüleenist (PP).
Saastevastane, endotoksiini-, DNA-, RNaasi- ja pürogeenivaba;
Määrimisala on rangelt standardiseeritud
Üks spetsifikatsiooniplaadi pool on varustatud käepidemega, mida on lihtne kasutada
Steriilne suletud üksikpakend, et vältida proovivõtu teisest saastumist ja tulemuste vigu
Ühekordne kasutamine ristsaastumise vältimiseks ja töökoormuse vähendamiseks
Tere tulemast meiega koostööd tegema
Lugupidamisega
Michael Peng
michael@bkmbio.com
